产品简介
在酸性条件下，三氯醋酸（Trichloroaceticacid，TCA）与蛋白质形成不溶性盐，使蛋白质变性导致构象发生改变，蛋白暴露出较多的疏水性基团，蛋白发生聚集而沉淀。为了避免TCA对后续电泳的影响，沉淀的蛋白要使用洗涤液彻底清洗去除TCA。浓缩后的蛋白可以用于SDS-PAGE和Westernblot前的蛋白样品处理。
产品组分
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产品名称
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规格
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保存温度
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试剂A.沉淀剂
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10ml
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RT
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试剂B.洗涤液
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30ml
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RT
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试剂C.助沉淀剂
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5ml
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RT
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试剂D.中和液
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250ul
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RT
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1MNaCI
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1ml
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RT
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5×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（变性，还原）
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1ML
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-20℃
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40mM碳酸钠
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1ml
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RT
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操作方法
1.准备1.5ml干净的离心管，加入800ul蛋白样品溶液。
可选：如果样品溶液中离子强度低于10mM,补加8ul的1MNaCI溶液。若低于800ul的样品，加入8ul1MNaCI,用水补齐体积至800ul，使NaCI终浓度为10mM.
2.加入80ul试剂C-助沉淀剂，混匀，常温静置15min。
3.加入步骤2溶液1/8体积的试剂A-110μl，补加1/8体积水110ul，涡旋震荡10-30秒，使之充分混匀。
4.冰浴放置15min。
5.4℃,12000rpm（13000g）离心10分钟。注：离心后白色蛋白沉淀弥散性可见于离心管管壁上。
6.小心去掉上清液，保留沉淀。
注：请小心操作，可以用移液器辅助彻底吸弃上清。
7.沉淀中加入600μl试剂B，涡旋震荡10-30秒，彻底混匀。
注：试剂B有刺激性气味，请在通风橱内操作。
8.冰浴15min。
9.4℃,12000rpm（13000g)离心10分钟；在通风橱中，倒掉上清。残留上清用10μl吸头彻底吸弃，沉淀物通风晾干30-60秒。注：沉淀不能过分干燥，否则将导致蛋白不好溶解。
10.蛋白溶解：
根据下表选择溶解缓冲液
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下游实验
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溶解缓冲液
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SDS-PAGE电泳
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1×SDS-PAGE蛋白上样缓冲液（变性，还原）。
注：加入溶解缓冲液后，彻底溶解沉淀（37℃温浴处理），溶液正常颜色应为蓝色；如果溶液为淡绿色或黄色，加入1/10体积中和液D，使颜色变回蓝色。95℃处理5分钟，电泳上样
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BCA蛋白定量
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40mM碳酸钠pH11.25
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等电聚焦IEF/2D电泳
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7M尿素，2M硫脲，40mMTris，1%C7B2O或1%ASB-14pH10.4
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酶切实验
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100mM碳酸氢铵pH8.5
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保存温度
试剂盒常温运输；收到后，按照标签温度贮存；本试剂盒有效期1年
