🔍 问题排查 内参条带正常，目的条带却消失了？问题通常出在样本制备、蛋白丰度、抗体选择或封闭条件这四个环节。逐项核对，点击下方卡片查看对应解决方案。
01
样本无靶蛋白
诱导缺失 / 不表达
02
靶蛋白丰度极低
上样量不足
03
一抗失效
特异性差 / 孵育太短
04
封闭过度
高浓度奶粉/BSA
样本无靶蛋白 降解
细胞诱导缺失 / 组织不表达
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① 增设 阳性对照 ② 上样量 30–50 μg ③ PMSF 现加现用 ④ 检测 mRNA
靶蛋白丰度极低 ＜20μg/泳道
上样量不足
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① 上样量 30–50 μg ② PVDF 0.2μm 膜 ③ 4℃ 湿转过夜 ④ 丽春红 验证转膜 ⑤ 间断震荡
一抗失效、特异性差 浓度不当
孵育时间太短
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① 4℃ 过夜 孵育 ② 梯度稀释 摸索浓度 ③ 更换 文献单抗
封闭过度 表位遮盖
高浓度奶粉/BSA掩盖抗原表位
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① 缩短封闭 室温1h ② 禁用脱脂奶粉（磷酸化） ⚡ 磷酸化专享
