产品简介
本品适用于2.7-40KD变性蛋白的Tricine体系电泳。
操作步骤
制胶(以配制一块0.75/1.0mm厚度的8×10cm凝胶为例)
- 取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液，各2.0/2.7mL，混匀；
- 向步骤1的混合溶液中加入40/60μL的改良型促凝剂，混匀；
- 将步骤2的混合溶液注入制胶玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5cm即可
(注意：此溶液为过量，请勿全部注入，可留少许于配胶杯中，以判断胶凝固状况)，无需液封，直接加下层胶溶液即可，也可以根据自己习惯可液封。
- 取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，各0.5/0.75mL，混匀；
- 向步骤4的混合溶液中加入10/15μL的改良型促凝剂，混匀；
- 将步骤5的混合溶液注入制胶玻璃板中，插入梳齿；
- 待上层胶凝固后(约10-15min)，拔去梳齿即可用于电泳。
电泳
1.准备好：1xTris-Tricine-SDS电泳缓冲液（Cat:10610-1）。
2.将样品与Tricine蛋白上样缓冲液(变性，还原型，2×)等体积混匀，95℃加热5~10min，加热结束后，高速离心5min，上清即可用于电泳分析.
3.向电泳槽的内槽注满1×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液，外槽注入适量1×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液，轻轻拔出梳齿，用移液器将梳孔吹洗干净，将处理后的蛋白样品或Marker加入点样孔.
160v.90min。
注意：电泳结束后，应尽快进行后续步骤，防止多肽扩散出凝胶外。
染胶
1.因多肽在凝胶中易发生扩散，建议将电泳后的Tricine胶在异丙醇固定液(50%异丙醇，10%乙酸，40%纯水)中固定30min后，再进行染色。
2.弃去异丙醇固定液，加入适量考马斯亮蓝快速染液(免脱色)，以覆盖凝胶为宜，室温下于水平摇床上染色10~15min。如蛋白量较低，可适当延长染色时间，实际染色时间可根据条带显现程度决定。染色结束后，弃去染色液，加入纯水洗涤去除残留染液，即可观察结果。
