用途
仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中 12 羟二十烷四烯酸（12-HETE） 的浓度。
检测原理
本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗 12 羟二十烷四烯酸 （12-HETE）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入 12 羟二十烷四烯酸（12-HETE）校准 品和待测样本，再加入 HRP 标记的 12 羟二十烷四烯酸（12-HETE）抗原（酶标抗原），经过 温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-酶标抗原的免疫复 合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最 终转化为黄色，在酶标仪 450nm 波长上测定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）与待测样品 中 12 羟二十烷四烯酸（12-HETE）的浓度负相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中 12 羟二十烷四烯酸（12-HETE）的浓度。
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反应类型 |
竞争法 |
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规格 |
96T/48T |
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中文名称 |
12羟二十烷四烯酸（12-HETE）定量检测试剂盒（ELISA） |
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反应时间 |
1.5 h |
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检测方法 |
酶联免疫吸附测定 |
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检测范围 |
125 pg/ml – 4000 pg/ml |
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灵敏度 |
58.75 pg/ml |
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上样体积 |
50 μL/孔 |
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样本类型 |
血清、血浆、组织、细胞上清或其他生物样本 |
特异性
可检测样本中的 12 羟二十烷四烯酸（12-HETE） , 且与其它类似物无明显交叉反应。
重复性
板内，板间变异系数均<10%。
回收率
分别于定量血清或血浆样本中加入一定量的12-HETE（加标样品），重复测定并计算其均值，回收率为测定值与理论值的比率。
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样本 |
回收率范围（%） |
平均回收率（%） |
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血清（n=5） |
85-107 |
99 |
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EDTA血浆（n=5） |
89-109 |
97 |
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肝素血浆（n=5） |
85-99 |
95 |
标曲图
线性
在定值血清及血浆样本内加入适量的12-HETE，并倍比稀释成 1:2，1:4，1:8，1:16 的待测样本，线性范围即为稀释后样本中12-HETE含量的测定值与理论值的比率。
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样本 |
1:2 |
1:4 |
1:8 |
1:16 |
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血清（n=5） |
93-105 % |
89-109 % |
88-108 % |
85-107 % |
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EDTA血浆（n=5） |
88-104 % |
90-108 % |
90-108 % |
88-100 % |
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肝素血浆（n=5） |
84-106 % |
90-108 % |
86-104 % |
91-107 % |
批内差
取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批间差
选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值
精密度
精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV（%）=SD/mean×100 CV<10% Inter-批间差: CV<13%
稳定性
经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。
试剂盒的组成
▲未开封试剂盒，4℃保存；已开封，标准品-20℃保存，酶标板加干燥剂后密封4℃保存，其他4℃保存。
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英文名称 |
中文名称 |
规格 |
规格 |
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Microelisa stripplate |
包被微孔板 |
96T |
48T |
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Standard |
标准品 |
0.3ml/管*6 |
0.3ml/管*6 |
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HRP-Corjugate |
HRP标记抗体 |
10mL |
5mL |
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Sample Diluent |
样本稀释液 |
6mL |
3mL |
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Chromogen SolutionA |
底物液A |
6mL |
3mL |
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Chromogen SolutionB |
底物液B |
6mL |
3mL |
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Stop Solution |
终止液 |
6mL |
3mL |
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20× Wash Solution |
20×浓缩洗涤液 |
25mL |
15mL |
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Product Description |
说明书 |
1份 |
1份 |
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Sealing film |
封板膜 |
2张 |
2张 |
实验所需自备物品
1、450±10nm滤光片酶标仪（建议仪器使用前预热）
2、高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL.
3、Eppendorf 移液器.
4、蒸馏水或去离子水.
5、脱脂棉吸水纸.
6、37℃恒温箱.
7、100ml和1000ml量筒.
