细胞样本的正确裂解是ELISA实验成功的关键前提。根据细胞类型（贴壁或悬浮），需采用不同的裂解方案。以下步骤均需在低温环境下操作，以最大程度保护蛋白活性。

1. 倒掉培养液 🚰：将培养瓶中的培养液彻底倒掉。
2. 洗涤细胞 🧼：每瓶细胞加入 5ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2～7.3）。平放轻轻摇动 1分钟 洗涤细胞，弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次。将PBS弃净后，将培养瓶置于冰上。
3. 配制裂解液 🧪：按 1ml裂解液加入 10μl PMSF（100mM），摇匀置于冰上。
   ⚠️ 注意：PMSF需摇匀至无结晶时才可与裂解液混合。
4. 细胞裂解 🧊：每瓶细胞加入 400μl 含PMSF的裂解液，于冰上裂解 30分钟。为使细胞充分裂解，培养瓶需经常来回摇动。
5. 收集细胞裂解物 🧹：用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快）。用移液枪将细胞碎片和裂解液移至 1.5ml离心管 中。
   ❄️ 提示：整个操作尽量在冰上进行。
6. 离心分离 🌀：于 4℃ 下 12000rpm 离心 5分钟。
   ⚠️ 注意：提前开启离心机预冷。
7. 保存样品 🧊：将离心后的上清分装转移至 0.5ml离心管中，放于 -20℃ 保存。

1. 培养细胞 🧫：培养 1×10⁶ - 1×10⁷ 个细胞。
2. 离心收集细胞 🌀：将细胞转移到 15ml圆形离心管中，4℃, 500g 离心 5分钟。
3. 洗涤细胞 🧼：小心去除上清，加入 5ml 预冷PBS 重悬细胞。 4℃, 500g 离心 5分钟。
4. 去除上清 🧹：尽可能多地去除上清，小心不要碰到细胞沉淀。
5. 加入裂解缓冲液 🧪：在细胞沉淀中加入 200μl ProcartaPlex Cell Lysis Buffer。
6. 混匀与孵育 🧊：吹吸混匀 8-10次，冰上孵育 5分钟。
7. 转移至离心管 🧫：将所有细胞转移到 1.5ml离心管中。
8. 离心分离 🌀：4℃, 14000g（离心机最大转速）离心 10分钟。
9. 保存样品 🧊：将上清转移到新管中。该上清可立即用于检测或保存在 -80℃。
10. 检测样品 🔍：按照多因子检测试剂盒操作方法检测。样本孔加入 25μl细胞裂解液 和 25μl Universal Assay Buffer。

建议细胞裂解后对上清进行蛋白定量检测，推荐使用 ZC-S0470 BCA蛋白法含量检测试剂盒。

操作建议：将所有样本使用预冷的 ProcartaPlex Cell Lysis Buffer 调整样本蛋白浓度为 4-8 mg/ml。

• 全程低温：所有操作需在冰上进行，使用预冷缓冲液，防止蛋白降解。
• 蛋白酶抑制：裂解液中必须添加PMSF等蛋白酶抑制剂，并现配现用。
• 充分裂解：贴壁细胞需裂解30分钟并辅以摇动；悬浮细胞需吹吸混匀并孵育。
• 蛋白定量：建议裂解后测定总蛋白浓度，以标准化样本上样量。