溶血是实验室常见的样本问题：采血不顺、剧烈震荡、离心不当、反复冻融，都可能使红细胞破裂、血红蛋白释放，样本肉眼可见发红。溶血样本能否用于 ELISA，需要结合溶血程度和实验用途判断。
结论：不是绝对不能测，但正式定量实验不推荐使用。
重度溶血应拒收并重新采集；轻度溶血可谨慎用于预实验参考。
溶血为什么干扰ELISA？
多数商用ELISA采用HRP（辣根过氧化物酶）标记与TMB显色体系。溶血释放的血红蛋白具有类过氧化物酶活性，主要带来三方面影响：
- 非特异性显色：不依赖抗原抗体结合即可催化TMB显色，导致假阳性和背景升高，低丰度细胞因子检测受影响更明显；
- 光谱叠加：血红蛋白在450 nm附近有吸收，会抬高酶标仪读数，校正难度较大；
- 基质干扰：红细胞内容物可能影响待测抗原的稳定性，并增加非特异吸附，使重复性变差、CV 增大。
按溶血程度分级处理
溶血程度分级示意：颜色越深代表溶血越严重，可用性越低
- 重度溶血（深红明显）：不用于正式实验，干扰程度难以控制，应优先重新采集样本；
- 中度溶血：不建议上机，数据漂移风险较高；
- 轻度溶血（仅隐约发红）：仅在样本珍贵、无法复采时用于预实验，可加大稀释倍数、增加洗板次数以降低背景；所得数据不能直接纳入正式结果，须注明溶血情况并设置正常样本对照。
需要注意：稀释只能降低干扰，无法消除干扰；当目标蛋白浓度接近检出限时，稀释还会导致信号过低而测不出。即使轻度溶血样本测得数值，也不宜直接作为正式数据或论文结果，审稿时可能被质疑。
如何从源头避免溶血？
从采血到保存的关键操作流程
- 采血动作轻柔，避免负压过大、用力推注；
- 采血管室温充分凝固后再离心，不要剧烈颠倒震荡；
- 1000–1500×g、2–8℃离心10–15 min，吸取血清时避开红细胞层；
- 样本分装保存，避免反复冻融，解冻时置于冰上缓慢融化；
- 分离好的血清尽快分装，减少红细胞长时间浸泡自溶。
溶血样本对 ELISA 结果的影响不可忽视。正式定量和论文数据应尽量使用清亮合格的样本；珍贵样本若仅轻度溶血，可作为预实验参考，并做好风险记录。把好样本质控这一关，有助于提高 ELISA 结果的可靠性。
