ELISA法具有灵敏度高、特异性强、重复性好的特点，并具有操作简便、无放射性危害的优点，因而多年来广泛应用于血站和医院的实验室中，但在测定中常会出现一些误差和问题。我们通过几年的实验观察，认为影响结果的因素有如下方面。
影响ELISA手工测定因素
🧪 1. 试剂盒因素
- 抗原/抗体活性：试剂中抗体（或抗原）的效价降低或失活，会导致结果不易判断。同时，ELISA法灵敏度高，对杂质的反应也灵敏，可能造成空白对照OD值偏高或假阳性。
- 酶结合物浓度：浓度过高会导致OD值假性增高。
⚙️ 2. 试验仪器因素
- 加样器：手工加样器若未经校正或性能不佳，吸取样品不精确，会使结果忽高忽低。
- 洗板机：每次洗板前，应检查洗板机针孔有无堵塞，以保证洗涤效果。
🧑🔬 3. 操作因素
- 试剂平衡：检测前先将试剂盒从冰箱取出置室温平衡 20分钟 后使用，试剂用完及时放回冰箱冷藏，以免造成假性降低。
- 加样操作：加样时注意勿触及包被板底部，以免擦伤包被物使抗体（抗原）脱落，影响准确性。
- 洗涤控制：洗涤不充分会使结果假性增高，过分洗涤则呈假阴性。
- 比色前处理：比色时应保持包被孔底部无异物、无水汽，特别是冬季板从37℃水浴箱取出时，应将板底擦干后再比色，水汽或气泡也会使OD值升高。
- 温育条件：抗原与抗体反应达到完全平衡，依赖于温度与时间。温度高于45℃易引起失活及标记物脱落，温度低于4℃则影响反应速度。
📌 核心要点
- 规范操作：由于ELISA实验的影响因素较多，在实际工作中必须操作规范、仔细。
- 系统排查：当出现异常结果时应从试剂、仪器、操作三方面逐一排查，避免片面归因。
- 持续改进：建议建立实验记录，对关键参数（温育温度、时间、洗板次数等）进行记录和追踪，便于优化流程。
