糖酵解是葡萄糖转化为丙酮酸并生成ATP的核心通路，其异常激活与肿瘤Warburg效应、缺血缺氧损伤密切相关。HK、PFK、PK、LDH、丙酮酸、乳酸与G6PDH七项指标，分别对应通路的酶活性调控、产物累积与旁路分流。

一、限速酶：HK、PFK与PK

HK（己糖激酶）催化葡萄糖磷酸化生成6-磷酸葡萄糖，是糖酵解第一个不可逆步骤，活性升高提示葡萄糖摄取与磷酸化增强。检测原理为HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH在340 nm有特征吸收峰。HK产物6-磷酸葡萄糖经异构化后进入PFK催化的步骤，二者活性常同向变化。

PFK（磷酸果糖激酶）催化果糖-6-磷酸生成果糖-1,6-二磷酸，是糖酵解的关键限速步骤，受ATP抑制、AMP激活。检测原理为PFK催化果糖-6-磷酸和ATP生成果糖-1,6-二磷酸和ADP，丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶进一步依次催化NADH氧化生成NAD⁺，在340 nm下测定NADH下降速率，即可反映PFK活性。

PK（丙酮酸激酶）催化磷酸烯醇式丙酮酸生成丙酮酸并产ATP，PKM2亚型与有氧糖酵解表型关联。检测原理为PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸，乳酸脱氢酶进一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD⁺，在340 nm下测定NADH下降速率，即可反映PK活性。

二、LDH与乳酸：终末通量的双重印证

LDH（乳酸脱氢酶）催化丙酮酸与乳酸互变，缺氧下还原丙酮酸以再生NAD⁺，是糖酵解亢进的经典标志。检测原理为LDH催化NAD⁺氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2,4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。LDH以PK生成的丙酮酸为底物，其活性与乳酸水平通常正相关。

乳酸是糖酵解终产物兼信号分子，直接测定可反映实际通量。检测原理为乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD⁺还原生成NADH和H⁺，H⁺传递给P微量试剂盒生成的P微量试剂盒H₂还原INT生成红色物质，在530 nm处有特征吸收峰。乳酸/丙酮酸比可反映碳流方向，比值升高倾向还原性终末代谢，偏低提示进入氧化途径。

三、丙酮酸：氧化与还原的分岔点

丙酮酸处于糖酵解与三羧酸循环交汇处，其含量取决于生成、还原与线粒体氧化三者的平衡，需与LDH及乳酸联合判读。检测原理为丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。

四、G6PDH：旁路分流对照

G6PDH（6-磷酸葡萄糖脱氢酶）是磷酸戊糖途径起始酶，催化6-磷酸葡萄糖氧化并生成NADPH，用于判断底物流向。检测原理为G6PDH催化NADP⁺还原生成NADPH，在340 nm下测定NADPH增加速率。

HK、PFK、PK顺序催化三个不可逆步骤且活性常同向变化，PK产物丙酮酸经LDH还原为乳酸，乳酸/丙酮酸比反映碳流方向，而6-磷酸葡萄糖在糖酵解与磷酸戊糖途径之间竞争分流，G6PDH与限速酶活性共同受能量及还原当量状态调控。