细胞活性氧（ROS）检测试剂盒（DCFH-DA荧光法）   一键复制产品信息

▎  产品简介

活性氧(Reactive Oxygen Species, ROS)包括超氧化物、过氧化氢、羟自由基以及具有高氧化活性的活性氧代谢产物。活性氧主要由中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞为代表的免疫细胞受到刺激后产生，其它体细胞在应激条件下线粒体电子传递异常也会产生活性氧。免疫细胞产生的活性氧能够抵御微生物的感染。在病理条件下，过度产生的活性氧也会导致机体损伤和引发各种疾病。

活性氧检测试剂盒(Reactive Oxygen Species Assay Kit，也称ROS Assay Kit)是一种利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测的试剂盒。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF，通过检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平，从而用于病理生理研究或药物筛选。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种经典活细胞中活性氧的检测方法。本试剂盒利用能够刺激多种免疫细胞产生活性氧的佛波酯(PMA)为阳性对照，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。本产品仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

▎  注意事项

1、初次使用试剂时，请适当离心后使用。

2、活性氧阳性对照(PMA)仅仅用于作为阳性对照的样品，并不是在每个样品中都需加入活性氧阳性对照。

3、初次测定活性氧，可取小鼠骨髓细胞，1×106细胞/孔，接种到24孔板中，加入1ml无血清培养基稀释1000倍的DCFH-DA，然后再加入1ul PMA溶液(1000×)刺激30-60min，检测活性氧作为阳性对照。通常刺激后0.5-4h可观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30min内观察不到活性氧的升高，可以适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，可以适当降低活性氧阳性对照的浓度。

4、对于某些细胞，如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强，可以按照1:2000-1:5000稀释DCFH-DA，使装载探针时DCFH-DA的浓度为2-5μM。探针装载的时间也可以根据情况在15-60min内适当进行调整。

5、探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

6、探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。

7、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间(刺激时间除外)，以减少各种可能的误差。

8、荧光酶标仪检测时须使用适合荧光检测的黑板或白板。

9、如果定量的话需要制作标准曲线。先做一个不同浓度H2O2氧化DCFA荧光值，做一条标准曲线，X轴为H2O2浓度，Y轴是荧光值，得出一个方程，再看样品的荧光值即Y值是多少，对应的X值即对应的H2O2浓度。

10、实验组荧光值不高可能是因为在装载探针后有的细胞容易漂起来，洗细胞时一部分细胞会被吸走。所以在种细胞时可以把细胞量增加一倍，这样细胞紧密连接，贴壁比较牢，荧光值就高了。

11、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。低温运输，-20℃避光保存。