实验收费标准
| 项目编号 | 项目名称 | 计价单位 | 单价 |
| ZC1102 | WB（普通蛋白,磷酸化蛋白) | 个 | 140元 |
服务介绍
通过电泳区分不同的蛋白组分，并转移至固相支持物（膜），通过特异性试剂（抗体）作为探针，对靶物质进行检测。可检测到低至1～5ng（最低可到10～100pg）中等大小的靶蛋白。
实验结果展示
实验流程
Western Blot实验步骤
1、 细胞总蛋白提取
（1）对于悬浮细胞: 离心收集细胞，每10⁶细胞加250 ul RIPA（在使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂），振荡。如果需要提高蛋白浓度，可以适当减少细胞总蛋白提取试剂体积。
（2） 对于贴壁细胞:
① 用TBS冲洗细胞2-3次。最后一次彻底吸干残留液。
② 加入适当体积的 RIPA（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）于培养板、瓶内3-5min。期间反复晃动培养板、瓶，使试剂与细胞充分接触。
③ 用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。
（3） 冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。
（4） 12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。
2、 组织蛋白提取：
（1） 组织块用冷TBS洗涤2-3次，去除血污，剪成小块置于匀浆器。加入10倍组织体积本试剂（使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂）冰上彻底匀浆。如果需要提高蛋白浓度，可以适量减少该试剂体积。
（2） 将匀浆液转移至1.5ml离心管中，振荡。冰浴30min，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。
（3） 12000g离心5min，收集上清，即为总蛋白溶液。
3、 蛋白浓度测定：BCA法侧蛋白浓度
4、 SDS-PAGE电泳
（1） 清洗玻璃板
（2）灌胶与上样
① 将玻璃板对齐后放入夹中卡紧，操作时要使两玻璃对齐，以免漏胶。
② 按实验安排配制分离胶，加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。大约45min后可倒去胶上层水并用吸水纸将剩余水吸干。
分离胶配比
| 分离胶浓度 | ||||||||||||
| 试剂 | 8% | 10% | 12% | 15% | 18% | 20% | 8% | 10% | 12% | 15% | 18% | 20% |
| H2O ml | 4.63 | 4 | 3.3 | 2.3 | 1.3 | 0.63 | 6.9 | 5.9 | 4.9 | 3.4 | 1.9 | 0.9 |
| 30％丙烯酰胺（29：1） ml | 2.67 | 3.3 | 4 | 5 | 6 | 6.67 | 4 | 5 | 6 | 7.5 | 9 | 10 |
| 1.5M TRIS－Hcl(PH 8.8) ml | 2.5 | 2.5 | 2.5 | 2.5 | 2.5 | 2.5 | 3.8 | 3.8 | 3.8 | 3.8 | 3.8 | 3.8 |
| 10％SDS ml | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
| AP ml | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 | 0.15 |
| TEMED ul | 5ul | 5ul | 5ul | 5ul | 5ul | 5ul | 7.5ul | 7.5ul | 7.5ul | 7.5ul | 7.5ul | 7.5ul |
| 总体积 ml | 10ml | 15ml | ||||||||||
| 5%浓缩胶配比 | ||||||||||||
| 试剂 | 浓度 5% | |||||||||||
| H2O ml | 2 | 3 | 4 | 6 | ||||||||
| 30％丙烯酰胺（29：1）ml | 0.5 | 0.75 | 1 | 1.5 | ||||||||
| 1M TRIS－Hcl(PH 6.8)ml | 0.5 | 0.75 | 1 | 1.5 | ||||||||
| 10％SDS ul | 40 | 60 | 80 | 120 | ||||||||
| AP ul | 30 | 45 | 60 | 90 | ||||||||
| TEMED ul | 4ul | 6ul | 8ul | 12ul | ||||||||
| 总体积 ml | 3ml | 4.5ml | 6ml | 9ml | ||||||||
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