NF-κB 信号通路是调控炎症反应、免疫应答及细胞存活等生理病理过程的核心通路，其激活与调控涉及多个关键分子，对应的 ELISA 指标可从通路上游激活因子、通路核心分子、下游效应因子三个层面进行分类，能精准反映通路的活化状态。
一、通路上游激活相关ELISA指标
NF-κB信号通路的激活始于上游信号分子的刺激，这些分子如同"导火索"，点燃整个信号传导级联反应。通过ELISA检测这些上游激活因子的水平，能为通路活化提供早期预警信号。
作为经典的促炎因子，是激活NF-κB通路的重要"开关"。当TNF-α与细胞膜上的TNF受体（TNFR）结合后，会启动一系列下游级联反应，最终导致NF-κB活化。ELISA检测TNF-α的含量，可直接反映其对NF-κB通路的初始激活强度。在感染、自身免疫病等研究模型中，TNF-α的水平变化常被用作评估通路激活诱因的重要指标。
同样是不容忽视的上游激活因子。它通过结合IL-1受体，激活MyD88依赖的信号通路，进而磷酸化IκB激酶（IKK）复合物，最终激活NF-κB。在实际研究中，ELISA检测IL-1β水平常与TNF-α联合使用，这样可以更全面地判断炎症微环境对NF-κB通路的驱动作用。
作为革兰氏阴性菌的细胞壁成分，可通过TLR4-MyD88通路激活NF-κB。虽然在多数实验中，LPS多通过外源性添加来干预实验，但在某些特定模型（如内毒素血症模型）中，也可通过ELISA检测样本中内源性LPS的含量，以此评估其对通路的激活贡献。
二、通路核心分子相关ELISA指标
如果说上游激活因子是NF-κB通路的"导火索"，那么通路核心分子就是整个信号传导的"枢纽"。这些分子的变化直接反映通路的活化状态，是判断通路激活程度的关键依据。
在通路调控中扮演着"守门人"的角色。静息状态下，NF-κB二聚体与IκBα结合并滞留于细胞质中，无法发挥作用。当通路激活时，IKK会磷酸化IκBα，使其泛素化降解，NF-κB得以释放并进入细胞核。ELISA可分别检测总IκBα和磷酸化IκBα（p-IκBα），总IκBα的下降或p-IκBα的升高，都提示NF-κB通路处于活化状态，这是通路激活的核心标志之一。
NF-κB家族成员是通路的"执行者"，其中p65（RelA）是最具代表性的功能亚基。ELISA可分别检测细胞质p65和细胞核p65的含量，当细胞质p65减少、细胞核p65增多时，直接反映了NF-κB的核转位过程，这是通路活化的直接证据。此外，还可检测p50/p65二聚体的含量，以此评估功能性NF-κB复合物的形成水平。
IKK复合物相关分子是激活NF-κB的"关键推手"。IKK是磷酸化IκBα的关键激酶，包含IKKα、IKKβ、IKKγ（NEMO）等亚基。ELISA可检测磷酸化IKKβ（p-IKKβ）的水平，p-IKKβ的升高提示IKK复合物被激活，是NF-κB通路上游信号传导的重要标志。
三、通路下游效应因子相关ELISA指标
NF-κB通路的最终生物学效应体现在下游效应因子的表达变化上。这些效应因子如同"信使"，将通路活化的信号传递到细胞的各个角落，引发一系列生理病理反应。
炎症相关细胞因子是NF-κB通路激活后最常见的效应分子。除了上游的TNF-α、IL-1β外，NF-κB还可诱导IL-6、IL-8、IL-12、IFN-γ等细胞因子的表达。通过ELISA检测这些细胞因子的分泌水平，可直观评估NF-κB通路介导的炎症应答强度。例如，IL-6的高表达常与NF-κB驱动的慢性炎症密切相关，在多种慢性疾病的研究中，IL-6的检测都是评估炎症程度的重要指标。
趋化因子在免疫细胞的募集过程中发挥着重要作用。如MCP-1（单核细胞趋化蛋白1）、RANTES等趋化因子，其表达受NF-κB调控，能够招募免疫细胞浸润到炎症部位。ELISA检测这类趋化因子的含量，能反映NF-κB通路在免疫细胞募集过程中的作用，常用于炎症浸润相关疾病模型的评估。
抗凋亡蛋白是NF-κB通路调控细胞存活的重要"武器"。NF-κB可调控Bcl-2、Bcl-xL、XIAP等抗凋亡蛋白的表达，从而抑制细胞凋亡。ELISA检测这些抗凋亡蛋白的水平，可评估NF-κB通路在细胞存活与凋亡平衡中的作用，这一指标在肿瘤、缺血再灌注损伤等研究领域具有重要意义。
黏附分子参与了细胞间的相互作用及免疫细胞的迁移过程。如ICAM-1（细胞间黏附分子1）、VCAM-1（血管细胞黏附分子1），其表达受NF-κB调控，在血管内皮炎症、免疫细胞黏附过程中发挥着关键作用。ELISA检测这类分子的含量，可反映NF-κB通路在这些生理病理过程中的功能。
在实际研究中，不同的研究场景需要选择合适的ELISA指标组合。例如，研究通路激活机制可优先检测p-IKKβ、p-IκBα、核p65；评估炎症效应则可联合检测IL-6、MCP-1等下游因子。